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進入微生物室的物品通過傳遞窗，經過紫外消毒后進入微生物室。為了確認傳遞窗紫外燈的消毒效果，特起草本方案對其進行驗證。本驗證用于QC微生物室、無菌室傳遞窗紫外燈表面消毒效果檢查。
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儀器名稱 |
型號或規格 |
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凈化工作臺 |
HS-1300-V型 |
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菌落計數器 |
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紫外線強度測定儀 |
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穩壓器 |
220V |
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細菌培養箱 |
SHP-150型 |
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ù菌培養箱 |
GNP-9270型 |
3.1滅菌刻度吸管（1mL，10mL）
3.2滅菌試管
3.3滅菌平皿
3.4酒精燈
3.5載體：（1.0×1.0cm的玻片）
4.1純化水
4.2營養瓊脂培養基
4.3改良馬丁瓊脂培養基
4.4營養肉湯培養基
4.5改良馬丁培養基
4.6金黃色葡萄球菌[CMCC（B）26 003]
4.7枯草芽孢桿菌[CMCC（B）63 501]
4.8大腸桿菌[CMCC（B）44 102]
4.9白色念珠菌[CMCC（F）98 001]
4.10稀釋液（0.1％吐溫80，0.1％蛋白胨溶液）
5.1 試驗環境
試驗在潔凈度10 000級下的局部潔凈度100級的單向流空氣區域內進行，全過程嚴格遵守無菌操作。單向流空氣區、工作臺面及環境定期按《醫藥工業潔凈室（區）懸浮粒子、浮游菌和沉降菌的測試方法》的現行國家標準進行潔凈度驗證。
ÿ次操作開始前，開紫外燈照射1小時。
5.2 培養基的制備
5.2.1營養瓊脂培養基
配方：
營養瓊脂培養基粉 31.0g
純化水 1000mL
配制：
根據需要量稱取營養瓊脂培養基粉置適宜容器中，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至7.1±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。
5.2.2 改良馬丁瓊脂培養基
配方：
改良馬丁瓊脂培養基粉 42.0g
純化水 1000mL
配制：
根據需要量稱取改良馬丁瓊脂培養基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至6.4±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌115℃×20分鐘。
5.2.3 營養肉湯培養基
配方：
營養肉湯培養基 20g
純化水 1000mL
配制：
稱取營養肉湯培養基20克，加1000mL純化水，加熱溶解，加熱至沸，冷卻至常溫，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌121℃×15分鐘。
5.2.4改良馬丁培養基
配方：
改良馬丁培養基粉 28.0g
純化水 1000mL
配制：
根據需要量稱取改良馬丁培養基粉，按配方比例加入純化水，水浴加熱使溶解，調pH至6.4±0.2，分裝于適宜容器，置高壓滅菌器滅菌115℃×20分鐘。
5.3方法驗證試驗
5.3.1輻照強度測定
5.3.1.1開啟紫外燈5min后，用中心波長為253.7nm的紫外線強度測定儀在燈管下方垂直1m的中心處測量其輻照度值（uW/cm2）。
5.3.1.2測量時，電壓應穩定在220V。
5.3.1.3普通型或低臭氧型直管紫外線燈（30W），在燈管下方垂直1m的中心處，新燈管的輻照度值應≥90 uW/cm2 。使用中的燈管的輻照度值應≥70 uW/cm2 ，低于此值者應予更換。
5.3.2 照射劑量
表面消毒接受的照射劑量，應達殺滅目標微生物所需。對大腸桿菌，照射劑量應達到7.5×103 uW·s/cm2,對金黃色葡萄球、白色念珠菌、枯草芽孢桿菌應達到2.53×104uW·s/cm2。
5.3.2.1照射劑量計算：
照射劑量（uW·s/cm2 ）＝紫外燈管強度（uW/cm2）×時間（s）
5.3.3 細菌及其芽孢和真菌殺滅效果的測定
5.3.3.1菌液的制備
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接種菌種名稱 |
接種培養基 |
培養條件 |
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金黃色葡萄球菌新鮮培養物 |
營養肉湯培養基 |
30～35℃培養18～24小時 |
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大腸桿菌新鮮培養物 |
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枯草芽孢桿菌新鮮培養物 |
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白色念珠菌新鮮培養物 |
改良馬丁培養基 |
23～28℃培養24～48小時 |
金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌、大腸桿菌、白色念珠菌培養后，將菌液進行活菌計數。
5.3.3.2 將滅菌載體平放于滅菌平皿內，ÿ個載體滴注定量菌懸液，（載體回收菌量達5×105～5×106cfu/片），涂勻，放37℃培養箱烘干。開啟紫外燈5min后，將16個染菌玻片平放于滅菌平皿內，水平放于適當距離照射，于4個不同間隔時間（15min、30 min、45 min、60 min）各取出4個染菌玻片，分別投入4個盛有5mL洗脫液試管中，振打80次。
5.3.3.3經適當稀釋后，取1mL洗脫液，作平板傾注，ÿ個染菌玻片接種兩個，細菌放30～35℃培養48小時作活菌計數，真菌放23～28℃培養72小時作活菌計數。
5.3.3.4陽性對照，除不做照射處理外，取4個染菌玻片，分別投入4個盛有5ml洗脫液試管中，振打80次。余按7.4.2.3同樣操作。
5.3.3.5計算殺滅率
殺滅率（％）＝ （陽性對照回收菌數－試驗組回收菌數）/陽性對照回收菌數 ×100％
5.3.3.6判定標準 對指示菌殺滅率≥99.9％判為消毒合格。
附件1. 試驗菌數量測定原始記¼
傳遞窗構造或紫外燈管放置λ置發生改變時。
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文件編號 |
文件名稱 |
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020141 |
微生物實驗室管理 |
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020143 |
物品進出微生物檢驗室 |
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020342 |
微生物檢驗區的清潔消毒 |
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020343 |
培養基的配制 |
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020344 |
細菌的接種、傳代和保存 |
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020377 |
高壓滅菌 |
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021267 |
微生物數量的測定 |
QA必須參與驗證的評審階段；
QA必須審閱最終報告（包括草案）；
QA審閱者不應是參與實施的其他QA人員。
在實施過程中，如果方案需要修改，必須提交書面的報告，闡述修改的原因，修改的內容，并經過驗證小組負責人及QA的認可。修改后的方案同先前執行的方案一起歸檔。
所有的相關文檔都應該保留至少5年，這些文檔應包括如下內容：
原始方案、修改后的方案（如果有的話）、偏差報告、原始數據、原始報告和最終報告、其中，報告應該包括以下內容：
記¼的原件（或復印件）、測試項目及條款、實驗開始和結束的日期、材料和方法描述、出現的偏差描述（如果有的話）、實驗結果。
